关键词:
急性髓系白血病
环状RNA hsa_circ0005273
微小RNA-143-3p
增殖
转移
机制
摘要:
目的:探讨环状RNA hsa_circ0005273在急性髓系白血病(AML)中的表达及其对肿瘤细胞生长和转移的调控作用及其机制。方法:收集20例AML患者骨髓标本及2例健康骨髓捐献者标本,培养人正常骨髓基质细胞系和AML细胞系,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测hsa_circ0005273及微小RNA(miR)-143-3p在临床样本与细胞系中的表达。将AML细胞系HL-60细胞分为对照组、si-NC组(转染si-NC)及si-hsa_circ0005273组(转染si-hsa_circ0005273),采用RT-qPCR检测转染效率,采用CCK-8法、集落形成实验、流式细胞术、Annexin V-FITC/PI双染法、Transwell小室实验分别观察细胞增殖活性、集落形成、周期分布、凋亡以及迁移与侵袭能力。利用StarBase数据库预测hsa_circ0005273与miR-143-3p结合位点,并通过双荧光素酶报告实验验证两者的靶向关系。结果:与健康志愿者骨髓相比,20例AML患者骨髓中hsa_circ0005273相对表达量上调(P<0.05)。AML细胞系中hsa_circ0005273相对表达量高于人正常骨髓基质细胞系(均P<0.05),HL-60细胞上调最为明显。与对照组和si-NC组比较,si-hsa_circ0005273组HL-60细胞中hsa_circ0005273相对表达量显著下调,说明转染成功。此外,与对照组和si-NC组比较,si-hsa_circ0005273组HL-60细胞增殖活性及集落形成数目降低,G 2/M期比例增加,细胞凋亡率上升,迁移数目及侵袭数目减少(均P<0.05)。miR-143-3p在20例AML骨髓及各AML细胞系中的相对表达量要低于健康志愿者骨髓和人正常骨髓基质细胞系,而敲低hsa_circ0005273可使HL-60细胞内miR-143-3p相对表达量上调(均P<0.05)。经预测发现hsa_circ0005273与miR-143-3p存在互补结合位点。与转染阴性对照(NC)模拟物(mimic)与hsa_circ0005273野生型(WT)比较,共转染miR-143-3p mimic与hsa_circ0005273 WT的细胞中相对荧光素酶活性下降(均P<0.05)。结论:hsa_circ0005273在AML中高表达,敲低其表达可抑制AML细胞增殖,诱导G 2/M期阻滞并促进凋亡,同时抑制细胞迁移与侵袭,其机制可能与其通过海绵吸附miR-143-3p有关。