关键词:
大黄甘遂汤
恶性腹水
肿瘤微血管生成
缺氧诱导因子1α
血管内皮生长因子/血管内皮细胞生长因子受体2/细胞外信号调节激酶信号通路
摘要:
目的:探讨大黄甘遂汤对恶性腹水(MA)小鼠腹膜肿瘤微血管生成的影响与作用机制。方法:首先开展大黄甘遂汤急性毒性研究;其次通过腹腔注射H22肝癌细胞悬液建立MA小鼠模型,造模成功后随机分为模型对照组、恩度3×10-3 g/kg组、华蟾素0.5 g/kg组、大黄甘遂汤5、10、20 g/kg组,每组10只,连续给予相应药物7天。记录小鼠一般状态和死亡情况;测定腹水量;HE染色观察腹膜组织病理学变化;免疫组化和透射电镜检测腹膜微血管密度与超微结构;RT-PCR检测腹膜组织缺氧诱导因子1α(Hif1α)、血管内皮生长因子(Vegf)、血管内皮细胞生长因子受体2(Vegfr2)、丝裂原活化蛋白激酶1(Mapk1)mRNA水平;WB检测HIF1α、VEGF、VEGFR2、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)蛋白表达。结果:急性毒性实验显示,大黄甘遂汤在75 g/kg剂量范围内无小鼠死亡,提示其安全性良好。药效结果显示,与正常对照组比较,模型对照组腹水量显著升高(P<0.01),腹膜组织肿瘤细胞增生及新生血管形成明显,微血管密度显著升高(P<0.01),血管结构异常,Hif1α、Vegf、Vegfr2、Mapk1 mRNA和HIF1α、VEGF、VEGFR2、ERK、pERK蛋白表达水平以及pERK/ERK比值显著增高(P<0.01);与模型对照组比较,大黄甘遂汤各给药组腹水量显著降低(P<0.05),腹膜肿瘤细胞增生、血管新生和微血管密度有降低趋势,电镜结果显示,腹膜血管结构趋于正常,Hif1α、Vegf、Vegfr2、Mapk1 mRNA表达下调(P<0.01,P<0.05),大黄甘遂汤20 g/kg组HIF1α、VEGF、VEGFR2、ERK、pERK表达与pERK/ERK比值下调(P<0.01)。结论:大黄甘遂汤可能通过改善肿瘤缺氧环境中HIF1α的堆积,调节VEGF/VEGFR2/ERK信号通路,缓解肿瘤微血管生成,从而达到治疗MA的目的。