关键词:
羟基磷灰石
肿瘤相关巨噬细胞
极化
肿瘤微环境
NF-κB
信号转导与转录激活因子
摘要:
目的 骨质破坏产物羟基磷灰石(HA)颗粒在肿瘤微环境中对肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)极化状态的影响及其潜在分子机制,旨在为靶向TAMs治疗骨相关肿瘤提供实验依据。方法 构建体外共培养体系,模拟骨质破坏释放HA颗粒的肿瘤微环境,设置不同浓度处理组。采用流式细胞术检测CD86、CD206等表型标志物,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测极化相关因子[白细胞介素(IL)-10、IL-12等]表达水平。应用蛋白质免疫印迹法检测核因子(NF)-κB与信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路关键蛋白表达水平,并结合NF-κB抑制剂(BAY 11-7082)及STAT3抑制剂(Stattic)进行通路干预验证。结果 HA颗粒可剂量依赖性诱导巨噬细胞向M2型极化。流式细胞术显示,HA 10和100μg/ml组中CD206阳性比例分别升至43.3%和46.5%,而CD86下降至17.8%;qRT-PCR结果提示,HA100μg/ml组CD206和IL-10表达为对照组的5.2倍和4.5倍(t=8.564、7.922,P<0.01),CD86和IL-12分别下降至0.3倍和0.2倍(t=6.241、7.153,P<0.01)。蛋白质印迹法结果显示HA可上调p-IKK-α/β、p-NF-κB及pSTAT3表达,且上述蛋白水平在相应抑制剂干预下下降。机制验证显示,NF-κB与STAT3通路抑制剂可部分逆转上述表达趋势,IL-10蛋白水平由(260±20)pg/ml下降至(115±10)pg/ml(t=11.232,P<0.05)。结论 HA颗粒可通过激活NF-κB和STAT3信号通路,诱导巨噬细胞向促肿瘤型M2型TAMs极化,可能在骨质破坏相关肿瘤进展中发挥免疫调控作用,为TAMs靶向干预提供潜在思路。