关键词:
E2F转录因子8
血清淀粉样蛋白A1
乳腺癌
糖酵解
巨噬细胞
摘要:
为探究E2F转录因子8(E2F transcription factor 8, E2F8)在乳腺癌细胞糖酵解和肿瘤免疫抑制中的分子机制,收集12例乳腺癌患者组织,采用免疫组织化学染色和Western blotting检测E2F8的表达;Western blotting检测人乳腺癌细胞系和正常乳腺细胞E2F8的表达水平。构建稳定过表达E2F8和血清淀粉样蛋白A1(serum amyloid A1, SAA1)的MCF-7细胞株及其阴性对照细胞株、稳定敲低E2F8和SAA1的T47D细胞株及其阴性对照细胞株,Western blotting检测糖酵解相关蛋白乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A, LDHA)、己糖激酶2(hexokinase 2, HK2)、丙酮酸激酶M2(pyruvate kinase M2, PKM2)表达水平;qRT-PCR检测细胞中IL-6、TNF-α、 C-X-C基序趋化因子配体10(C-X-C motif chemokine ligand 10,CXCL10) mRNA水平。使用佛波酯诱导THP-1细胞分化为M0型巨噬细胞,将M0型巨噬细胞与稳定敲低E2F8的T47D细胞和过表达MCF-7细胞共培养,通过流式细胞术检测M1/M2型极化情况。结果显示,E2F8在乳腺癌组织中高表达,在乳腺癌细胞中的表达水平高于正常细胞;E2F8和SAA1过表达组细胞SAA1、 LDHA、 HK2和PKM2蛋白表达水平均升高,而敲低组结果相反;E2F8过表达组巨噬细胞M1型极化比例显著减少(P<0.001),而M2型极化比例显著增加(P<0.01),敲低组结果相反(P<0.05); E2F8过表达组IL-6、TNF-α、CXCL10 mRNA水平显著下降(P<0.01),敲低组结果相反(P<0.01)。该研究提示,E2F8可以通过促进SAA1蛋白表达和释放增强乳腺癌细胞糖酵解水平。