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关键词： 拟缺香茶菜   肿瘤细胞   放大效应   荧光成像   分布特性  

摘要： 荧光成像分析是生物医学领域中用于研究目的蛋白亚细胞定位及蛋白质相互作用的常用手段，但很多模式细胞的荧光成像效果不佳，其成像分辨率提升受限于细胞的自身厚度和体积。膨胀显微成像是解决此现象的技术手段之一，但现有方法操作复杂、稳定性差且对免疫荧光抗体的浓度要求较高。笔者团队在前期研究中发现，拟缺香茶菜的分离提取物Reniformin A对肿瘤细胞有放大作用。基于上述背景，本研究旨在探索低成本且操作便捷的提升荧光成像分辨率的方法。首先，考察了不同质量浓度及不同处理时间下，拟缺香茶菜水提物对A549、MDA-MB-231和HeLa 3种肿瘤细胞的影响，结果显示：拟缺香茶菜水提物对A549和MDA-MB-231细胞有显著的体积放大作用，且能有效提高荧光成像分辨率，其最佳处理时间和质量浓度分别为24 h、8 mg/mL；同时，拟缺香茶菜水提物对HeLa细胞无显著放大效果，提示其作用具有细胞特异性。随后，对关键细胞器及细胞骨架进行了形态学分析，结果显示，拟缺香茶菜水提物并不影响A549和MDA-MB-231细胞的基本骨架结构（α-tubulin、F-actin）及关键细胞器（溶酶体、线粒体）的形态和分布特性。接下来，以A549细胞为模型，用已知定位信息的3个蛋白质（METTL6、SLC38A7和MYH9）进行了亚细胞定位验证，结果显示，拟缺香茶菜水提物处理没有改变3种蛋白质的原有定位特性，且没有引起非特异的共定位现象发生。最后，以A549细胞为模型，通过免疫荧光实验初步探究了拟缺香茶菜水提物提升肿瘤细胞荧光成像的潜在机制，推测拟缺香茶菜水提物可能是通过增强整合素功能、稳定黏着斑、优化黏着斑动态，进而为细胞体积增大提供更好的支撑作用。以上结果表明：高质量浓度(8 mg/mL)拟缺香茶菜水提物对部分肿瘤细胞有放大效应，可有效提升荧光成像分析的便利度和分辨率，且不影响原有细胞结构的形态及分布特性，未来具有较大的应用前景和进一步开发价值。

关键词： 进展期结直肠肿瘤   早期再发   影响因素   预测模型   可解释性分析  

摘要： 背景 结直肠腺瘤切除术是降低结直肠癌发病率的有效方式，目前结直肠腺瘤切除术后1年内进展期结直肠肿瘤（ACRN）的再发率高，关于结直肠腺瘤切除后早期再发ACRN的预测模型构建缺乏相关研究。目的 采用机器学习的方法探讨结直肠腺瘤切除术后患者早期再发ACRN的影响因素，并构建结直肠腺瘤切除术后患者早期再发ACRN的预测模型。方法 回顾性纳入2017年1月—2023年8月郑州大学第一附属医院行3次以上结肠镜检查的结直肠腺瘤并行手术切除的222例患者为研究对象，根据术后1年内是否发生ACRN分为早期再发组（n=68,）和非早期再发组（n=154），收集患者一般资料和实验室检查指标。将研究对象按照8:2划分为训练集和测试集，通过Boruta和Lasso回归方法共同筛选预测因素，分别使用类别提升（Catboost）、随机森林（RF）、逻辑回归（LR）、支持向量机（SVM）4种机器学习方法构建预测模型，绘制受试者工作特征（ROC）曲线、校准曲线、临床决策分析（DCA）曲线，评估预测模型的性能。采用特征重要性和SHAP可解释性分析讨论结直肠腺瘤切除术后患者早期再发ACRN的相关危险因素。结果 早期再发组和非早期再发组腺瘤数量、腺瘤大小、腺瘤部位、腺瘤异型增生程度、腹胀、临床症状个数、饮酒史、血小板计数、中性粒细胞与淋巴细胞计数比值（NLR）比较，差异有统计学意义（P<0.05）。基于Boruta和Lasso方法共同筛选出腺瘤大小、血小板计数、腺瘤异型增生程度、临床症状个数、三酰甘油-葡萄糖（TyG）、饮酒史、腺瘤数量共7个预测因素，根据上述7个预测因素构建Catboost、RF、LR、SVM 4种结直肠腺瘤切除术后早期再发ACRN的预测模型。ROC曲线分析结果显示，在训练集中，Catboost、RF、LR、SVM 4个模型的AUC分别为0.802、0.836、0.788、0.860；在测试集中，4个模型的AUC分别为0.772、0.749、0.705、0.685;Delong检验结果显示，4个模型的AUC两两比较，差异均无统计学意义（P均>0.05）。校准曲线分析结果显示，训练集中Catboost、RF、LR、SVM 4个模型的Brier分数分别为0.178、0.197、0.169、0.153，测试集中4个模型的Brier分数分别为0.188、0.201、0.191、0.198。DCA曲线分析显示，在训练集中基于Catboost、LR及SVM模型获得较高的临床净效益，在测试集中，Catboost和SVM模型可获得较好的临床净收益。基于Catboost模型的SHAP可解释性分析显示临床症状个数、腺瘤大小、腺瘤数量依次是预测术后ACRN早期再发的前3位重要特征，其中临床症状个数、腺瘤大小、腺瘤数量、腺瘤异型增生程度、TyG、血小板计数（SHAP值分别为：0.043、0.042、0.025、0.020、0.012、0.005）均与术后早期ACRN再发呈正相关，饮酒史（SHAP值为0.015）与术后早期ACRN再发呈负相关。结论 基于Catboost方法构建的风险预测模型具有良好的预测效果和临床实用性，可以用来预测结直肠腺瘤切除术后早期ACRN的再发。

关键词： 自噬   肿瘤免疫   免疫原性   癌症治疗  

摘要： 目的：系统阐述自噬在肿瘤免疫中的双重调控作用及其作为癌症治疗靶点的可能潜力。方法：通过查阅文献，汇总近年来关于自噬机制、肿瘤免疫逃逸及免疫激活的基础研究与临床试验，分析自噬在肿瘤细胞及免疫细胞中的功能调节及其治疗干预策略。结果：自噬在肿瘤免疫中扮演双重角色，既能作为肿瘤细胞的保护机制，促进其免疫逃逸，也可在过度激活或抑制时诱导肿瘤细胞死亡并增强抗肿瘤免疫反应。调控自噬活动可显著影响TME中的免疫细胞表型及功能，包括细胞毒性T淋巴细胞的激活，调节性T细胞和肿瘤相关巨噬细胞的重塑。纳米递送系统及药物“按需”调控自噬的策略显示出改善肿瘤治疗效果的广阔前景。结论：自噬在肿瘤免疫中的双重角色为精准肿瘤免疫治疗提供了新的靶点和策略。未来研究需明确不同肿瘤类型中自噬激活阈值，以实现个体化干预和优化治疗方案。

关键词： 胃癌   生物钟   铁死亡   染色质可及性   NPAS2  

摘要： 目的 探索表观重塑调控生物钟基因对胃癌细胞铁死亡的影响。方法 整合分析染色质可及性测序ATAC-seq、Bulk RNA-seq及scRNA-seq数据，从染色质可及性调控癌细胞基因表达的角度，筛选发现胃癌开放染色质可能招募生物节律相关的关键转录因子NPAS2。胃癌组织免疫组化染色和生存分析发现NPAS2高表达与胃癌进展和临床不良预后相关。调控功能方面，生物信息学分析提示节律因子NPAS2与铁死亡通路显著相关；构建敲低及过表达NPAS2胃癌细胞株，结合CCK-8、MDA含量测定、BODIPY荧光染色及流式细胞术等功能实验，证实NPAS2对胃癌细胞铁死亡的抑制作用。结果 昼夜节律转录因子NPAS2在胃癌进展中 mRNA和蛋白水平表达量均显著上升，且其高表达与患者不良预后密切相关。NPAS2高表达与铁死亡通路失活相关，NPAS2高表达胃癌组织中多个铁死亡抑制基因（如SLC7A11、ACSL3）表达显著升高。细胞生物学实验表明，在胃癌细胞中过表达NPAS2增强铁死亡抵抗能力，敲低NPAS2则促进细胞发生铁死亡。结论 胃癌开放染色质可能上调节律因子NPAS2表达，赋予胃癌细胞铁死亡抵抗特性，进而促进肿瘤进展；节律因子NPAS2可能作为调控胃癌铁死亡的潜在治疗靶点。

关键词： 穴位敏化   血流灌注量   HIF-1α   艾灸  

摘要： 目的：观察艾灸足三里穴对Lewis肺癌小鼠瘤体局部血流灌注的影响，研究艾灸改善肿瘤缺氧微环境的作用机制，并从HIF-1α/CCL28/Treg信号通路初步探索艾灸提高抗肿瘤免疫机制。方法：21只C57BL/6J小鼠随机分成空白组、模型组和艾灸组，每组7只。采用右腋下注射Lewis肺癌细胞（LLC）复制Lewis肺癌小鼠模型。模型复制成功后，艾灸双侧足三里穴，每次10min，隔日1次，共治疗7次。在干预结束24h后用激光散斑血流成像仪检测3组小鼠双侧足三里穴和肿瘤局部微循环血流灌注量（MBPU）；观察模型组和艾灸组肿瘤体积、瘤体质量并计算抑瘤率；采用ELISA法和Western blot法检测肿瘤组织中HIF-1α、CCL28的蛋白表达水平；流式细胞术检测肿瘤组织中Treg细胞数量。结果：与模型组比较，艾灸组可明显抑制肿瘤生长(P<0.05)，抑瘤率24.5%。模型组小鼠足三里穴MBPU显著低于空白组(P<0.05)，艾灸组小鼠足三里穴MBPU显著高于模型组和空白组(均P<0.05)。模型组小鼠肿瘤局部MBPU显著低于空白组小鼠同侧同部位健康皮肤(P<0.05)，艾灸组小鼠肿瘤局部MBPU显著高于模型组和空白组(均P<0.05)。ELISA和Western Blot检测结果显示，艾灸组肿瘤组织中HIF-1α和CCL28表达均低于模型组(P<0.05)。流式细胞术结果显示，艾灸组肿瘤组织中Treg细胞数量低于模型组(P<0.05)。结论：艾灸敏化状态的足三里穴可以有效改善Lewis肺癌小鼠肿瘤缺血缺氧状态，提升抗肿瘤免疫、抑制肿瘤生长，其机制与HIF-1α/CCL28/Treg通路有关。

关键词： 蛋白质激酶C底物80K-H   N-糖基化   多囊肝病   肿瘤  

摘要： 蛋白质激酶C底物80K-H（protein kinase C substrate 80K-H，PRKCSH），也称为葡萄糖苷酶II β亚基（glucosidase II beta subunit，GluII β），与葡萄糖苷酶II α亚基（glucosidase II alpha subunit，GluII α）相互作用共同参与调控内质网（endoplasmic reticulum ，ER）中糖蛋白的加工成熟过程，在N-糖基化这一关键的翻译后修饰中发挥重要作用。目前，PRKCSH基因突变与常染色体显性遗传性多囊肝病（autosomal dominant polycystic liver disease，ADPLD）的密切关系已被广泛研究关注。PRKCSH的多种功能，包括调节IGF1R和IRE1α等信号通路，使PRKCSH有望成为癌症免疫治疗的治疗靶点和生物标志物。同时，在癌症中PRKCSH可以通过响应内质网应激、协调细胞死亡程序和参与免疫治疗等途径，影响细胞生长、转移和对生长因子的反应，进而影响细胞自噬或细胞凋亡。PRKCSH还可以通过增强NK细胞和T细胞的活性，增强癌症治疗，调节抗肿瘤免疫。此外，PRKCSH可以通过选择性剪接产生不同的亚型，影响上皮-间充质转化（EMT）和肺癌细胞增殖等过程。PRKCSH虽然在多种疾病中的都有所发现，但其仍需要更多的证据来阐明PRKCSH的具体作用机制及其发展潜能。

关键词： 体寒瘤热   肿瘤微环境   辨证论治   整体观念   病证结合  

摘要： 肿瘤微环境（TME）具有高度的异质性，导致个体疗效差异，使得肿瘤临床治疗面临巨大挑战。中医药通过多靶点、多途径发挥综合调理的作用，且具有个体针对性的临床优势。课题组前期基于机体整体与肿瘤局部的正邪交争及寒热属性特点，提出“体寒瘤热”病机理论。机体“体寒”通过细胞外基质胶原沉积及纤维化、免疫抑制及免疫逃逸、Warburg效应、表皮生长因子受体驱动基因突变等机制诱发局部“瘤热”，即体寒生瘤热的过程。中医药主要以健脾益气、温阳散寒功效来抑制外周血中促肿瘤表型免疫细胞分化及其在TME中的浸润水平及促进外周血中抗肿瘤免疫细胞的分化及提升TME中的浸润水平，以行气、化湿、化痰、活血、祛瘀、清热、解毒等功效来调节基质微环境并抑制TME中成纤维细胞活化、抑制肿瘤相关炎性细胞向促癌型极化和胞外诱捕网形成等机制调节全身体寒与局部瘤热平衡来重塑TME。并提出在科研中以中医学“辨证论治”和“整体观念”为指导，病证结合构建“体寒瘤热”动物模型，研究肿瘤疾病不同证候的TME差异，并应用多组学技术探讨机体整体与肿瘤局部的关系，优化中医肿瘤学科研思路，突出中医药的治疗优势，从而提高临床疗效。

关键词： 异地就医   肿瘤   区域卫生资源优化   上海  

摘要： 目的 剖析上海市外来就医肿瘤患者的住院情况和特征分析，为异地就医政策制定优化与医院发展战略转型提供证据支持。方法 基于上海市健康信息网大数据平台，分析2019—2023年全市医疗机构住院病案数据，筛选肿瘤患者的住院数据，分析肿瘤外来就医患者的就诊特征。结果 2019—2023年，上海市外来就医的肿瘤患者住院人次数从44.49万人次增至54.89万人次，住院总费用从105.35亿元增至156.88亿元；60%以上的异地就医患者来自长三角地区，其中江苏患者占比30%以上。外来就医肿瘤患者主要的癌种为消化系统恶性肿瘤（26.52%）、呼吸系统恶性肿瘤（20.93%）、良性肿瘤（9.63%）、乳房恶性肿瘤（7.88%）；手术与操作类型主要以治疗性手术和化疗为主，靶向治疗和免疫治疗增幅明显。结论 肿瘤持续成为异地来上海市就医的重要疾病类别，优质医疗资源均衡布局减少了异地就医，就医地头部医院战略定位和服务亟需转型发展。从省内到跨省的异地就医DRG/DIP支付管理是未来改革配套重要举措。

关键词： 鲜竹沥   乳腺癌   放疗增敏   肿瘤微环境  

摘要： 目的：探究鲜竹沥重塑肿瘤免疫微环境增强乳腺癌放疗敏感性的机制。方法：建立4T1荷瘤小鼠模型，随机分为4组：模型组、放疗组(6 Gy60Co-γ射线)、鲜竹沥组(23.4 mL·kg–1)和鲜竹沥联合放疗组(6Gy60Co-γ射线＋23.4 mL·kg–1)，每组12只；鲜竹沥组和鲜竹沥联合放疗组于放疗前3 d开始给药，每日1次，连续灌胃20 d后结束实验，对肿瘤进行称质量并计算抑瘤率；采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和干扰素-γ（IFN-γ）水平；苏木素-伊红染色（H&E）检测肿瘤组织病理变化；TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡；免疫组化检测肿瘤组织中Ki67蛋白的表达；流式细胞术检测肿瘤组织CD4+、CD8+T细胞及M2型肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）和肿瘤引流淋巴结树突状细胞（DCs）细胞水平。结果：与放疗组相比，鲜竹沥联合放疗组显著抑制肿瘤生长（抑瘤率提高28.7%），血清中TNF-α和IFN-γ水平升高，病理组织切片显示肿瘤细胞减少，核皱褶显著，坏死面积增加，细胞凋亡率升高以及Ki67蛋白表达下降，同时显著增加肿瘤中CD4+、CD8+T细胞和肿瘤引流淋巴结中CD80+CD86+DCs细胞水平，降低M2 TAMs的占比。结论：鲜竹沥通过促进DCs成熟、增强T细胞浸润及降低M2 TAMs，显著提高放疗疗效，为乳腺癌综合治疗提供了新策略。

关键词： 蛋白修饰的金纳米簇   双光子-近红外荧光成像   荧光寿命   靶向药物递送  

摘要： 基于蛋白修饰的金纳米簇，先合成去铁蛋白修饰的金纳米簇(APO-AuNCs)，再利用去铁蛋白纳米笼的天然载药特性来加载阿霉素，构建靶向药物递送纳米体系(APO-AuNCs@DOX).结果显示，APO-AuNCs具有良好的原位生物成像效果，所制备的APO-AuNCs@DOX可整合原位生物成像与靶向药物递送功能.该功能化纳米体系为肿瘤早期诊断与治疗提供了新型工具.