关键词:
自然杀伤细胞
细胞骨架
力学表型
杀伤活性
摘要:
目的通过药物调控自然杀伤(natural killer,NK)细胞骨架动态活性,探究其对NK细胞力学表型及抗肿瘤杀伤功能的影响,并明确关键力学指标与杀伤活性的关联。方法以NK-92MI细胞为研究对象,分别采用促F-actin聚合药物Jasplakinolide(200 nmol/L,12 h)和非肌肉肌球蛋白II(non-muscle myosin II,NMII)抑制剂Blebbistatin(10μmol/L,24 h)干预细胞骨架动态活性。通过免疫荧光染色、牵引力显微镜及微管吮吸技术,检测细胞F-actin平均荧光强度、牵引力及皮质张力的变化;以SKOV3细胞为靶细胞,将药物处理后的NK-92MI细胞与SKOV3细胞按效靶比5∶1共培养5 h,利用流式细胞术检测NK-92MI细胞的体外杀伤效率,并分析力学表型与杀伤活性之间的关联。结果与对照组相比,Jasplakinolide处理后NK-92MI细胞F-actin平均荧光强度升高(P=0.011),牵引力中位数由8.332 Pa降低至3.020 Pa(P<0.0001),皮质张力由(166.1±13.66)pN/μm降低至(78.57±3.98)pN/μm(P<0.0001),对SKOV3细胞的杀伤效率由48.55%±1.95%降低至42.73%±0.54%(P=0.045)。Blebbistatin处理后,NK-92MI细胞F-actin平均荧光强度差异无统计学意义(P=0.279),牵引力中位数由6.468 Pa升高至13.26 Pa(P<0.0001),皮质张力由(116.5±7.03)pN/μm降低至(86.76±6.32)pN/μm(P=0.005),对SKOV3细胞的杀伤效率由41.42%±1.52%升高至47.72±1.78%(P=0.023)。相关性分析显示,NK-92MI细胞杀伤活性与牵引力呈正相关关系(R^(2)=0.9979,Spearman r=1.000),而与皮质张力及F-actin平均荧光强度未见明显线性相关。结论调控细胞骨架动态活性可改变NK细胞的力学表型与杀伤功能,其中抑制NMII活性可增强NK细胞杀伤效果,而促进F-actin聚合则产生相反效应。NK细胞牵引力与杀伤活性呈正相关关系,提示牵引力可能是反映NK细胞杀伤功能的重要力学指标。本研究为从细胞力学调控角度优化NK细胞免疫治疗提供了新的实验依据。