关键词:
子宫内膜肿瘤
核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3
巨噬细胞
肿瘤
分化
摘要:
目的 研究子宫内膜癌(EC)中核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(NLRP3)炎症小体对巨噬细胞极化及肿瘤迁移和侵袭的影响。方法 根据不同细胞分为RL95-2组(EC细胞)与人子宫内膜上皮细胞(h EEC)组;将悬浮生长的THP-1细胞经佛波酯诱导为贴壁的M0型巨噬细胞,分为未诱导组与诱导组;根据转染或处理不同分为si-NC组、si-caspase-1组、si-ASC组、si-NLRP3组、NLRP3转染组及NC组。采用过表达NLRP3或空载对照的RL95-2细胞诱导巨噬细胞M2极化,获得NLRP3-M与NC-M巨噬细胞,再分别与RL95-2细胞共培养。比较RL95-2与h EEC中NLRP3炎症小体[活化后可与含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase-1)、凋亡相关特异蛋白(ASC)、NLRP3]表达;检测THP-1与M0型巨噬细胞中CD68表达;分析敲低或过表达NLRP3对EC细胞迁移侵袭的影响;评估其对巨噬细胞M1/M2极化及相关因子[血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)]表达的影响;并进一步探讨NLRP3-M巨噬细胞对RL95-2细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化标志物(Vimentin、N-Cadherin、E-Cadherin)表达的影响。结果 EC细胞内caspase-1、ASC、NLRP3表达水平均高于h EEC,差异均有统计学意义(P<0.05)。THP-1未诱导组CD68相对表达水平为低于M0诱导组CD68表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较,si-caspase-1组、si-ASC组、si-NLRP3组RL95-2、h EEC内caspase-1、ASC、NLRP3相对表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较,si-caspase-1组、si-ASC组、si-NLRP3组对RL95-2迁移及侵袭能力有明显抑制,差异均有统计学意义(P<0.05)。相较于si-NC组,干扰NLRP3的RL95-2、h EEC细胞对巨噬细胞分化为M2表型的抑制显著(P<0.05),干扰caspase-1或ASC的RL95-2、h EEC对巨噬细胞分化为M1型、M2型的影响不明显,干扰NLRP3的RL95-2、h EEC对巨噬细胞分化为M1表型的影响不明显,差异均无统计学意义(P > 0.05)。相较于si-NC组,干扰NLRP3的RL95-2、h EEC明显降低巨噬细胞内VEGF、IL-10、TGF-β表达水平,差异均有统计学意义(P<0.05);与NC组比较,NLRP3转染可明显提升RL95-2、h EEC内NLRP3表达水平,与NC组比较,过表达NLRP3的RL95-2、h EEC细胞可明显促进巨噬细胞向M2表型分化,并可明显提升VEGF、IL-10、TGF-β表达水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。与NLRP3-M组比较,NC-M组RL95-2迁移、侵袭能力明显下降,且Vimentin、N-cadherin表达明显降低,E-cadherin表达明显上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 EC中NLRP3炎症小体通过对巨噬细胞极化予以诱导,可促进肿瘤迁移及侵袭。