关键词:
三阴性乳腺癌
肿瘤组织刚度
整合素β1
局部黏着斑激酶
yes相关蛋白
化痰散结方
摘要:
目的基于整合素β1/局部黏着斑激酶/yes相关蛋白(integrinβ1/FAK/YAP)力学信号通路探讨化痰散结方治疗三阴性乳腺癌(TNBC)的潜在作用机制。方法50只BALB/c小鼠随机分为模型组、阿霉素组及化痰散结方低、中、高剂量组,每组10只。各组小鼠采用4T1细胞同种原位移植法构建TNBC原位移植瘤模型。造模成功后模型组小鼠每日给予0.2 ml生理盐水灌胃,化痰散结方低、中、高剂量组分别给予化痰散结方溶液5.99、11.97、23.94 g/(kg·d)灌胃,阿霉素组每隔两天给予阿霉素溶液1.5 mg/kg腹腔注射,各组均给药30天。最后一次给药后处死小鼠,检测各组小鼠肿瘤重量和体积;采用HE染色、Masson染色、天狼猩红染色观察肿瘤组织病理形态及胶原纤维沉积程度;TUNEL染色检测肿瘤组织细胞凋亡情况;原子力显微镜测定肿瘤组织杨氏模量;免疫荧光法检测YAP核质定位;Western Blot法检测integrinβ1、FAK、YAP、磷酸化局部黏着斑激酶(p-FAK)蛋白水平;qRT-PCR法检测integrinβ1、FAK、YAP mRNA表达水平;采用Pearson相关性分析探究肿瘤组织杨氏模量、细胞凋亡率与integrinβ1/FAK/YAP通路相关蛋白水平的相关性。结果与模型组比较,阿霉素组和化痰散结方中、高剂量组小鼠肿瘤重量显著降低,阿霉素组和化痰散结方高剂量组小鼠肿瘤体积显著缩小(P<0.01)。化痰散结方高剂量组肿瘤重量低于化痰散结方低剂量组,肿瘤体积小于化痰散结方低、中剂量组(P<0.05)。化痰散结方中、高剂量组和阿霉素组肿瘤组织病理改善显著,胶原纤维沉积占比、YAP核质比均显著降低(P<0.01)。化痰散结方各剂量组及阿霉素组细胞凋亡率均显著升高,杨氏模量显著降低,integrinβ1、YAP mRNA表达水平均降低(P<0.05或P<0.01)。化痰散结方高剂量组integrinβ1、p-FAK、YAP蛋白水平低于模型组(P<0.05或P<0.01)。Pearson相关性分析结果显示,肿瘤组织杨氏模量与细胞凋亡率呈显著负相关(r=-0.93,P<0.01);integrinβ1、p-FAK、YAP蛋白水平与杨氏模量呈显著正相关(r=0.88、0.97、0.98,P<0.05),与细胞凋亡率呈显著负相关(r=-0.93、-0.97、-0.93,P<0.05)。结论化痰散结方可显著抑制TNBC模型小鼠肿瘤生长,其作用机制可能与通过抑制肿瘤组织integrinβ1/FAK/YAP力学信号通路从而降低肿瘤组织刚度有关。