关键词:
外泌体
miR-374a-5p
ARRDC3
CD8^(+)T细胞
PD-L1
摘要:
该研究旨在探究乳腺癌(BC)来源外泌体(Exo)通过miR-374a-5p靶向抑制蛋白结构域蛋白3(ARRDC3)的分子机制,及其在促进肿瘤免疫逃逸中的作用,为乳腺癌免疫治疗提供新靶点。研究采用qRT-PCR检测乳腺癌细胞中miR-374a-5p和ARRDC3的表达水平。提取MDA-MB-231细胞的外泌体,并将其与MDA-MB-231细胞共培养48 h。将MDA-MB-231细胞分为6组:Con组、ExoNC组、NC inhibitor组、miR-374a-5p inhibitor组、miR-374a-5p inhibitor+sh-NC组和miR-374a-5p inhibitor+sh-ARRDC3组。通过平板克隆、划痕实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。与CD8^(+)T细胞共培养,检测CD8^(+)T细胞凋亡水平及对癌细胞的杀伤率。ELISA法检测细胞上清中细胞因子水平,qRT-PCR和蛋白免疫印迹法检测PD-L1表达情况。结果显示,与正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,在MDA-MB-231、Hs578T、MDA-MB-468和MDA-MB-453等乳腺癌细胞中,miR-374a-5p表达显著上调,ARRDC3表达显著下调(P<0.05)。GEPIA数据库分析显示,ARRDC3在乳腺癌组织中表达水平显著降低(P<0.05)。与Con组相比,Exo-NC组和NC inhibitor组的miR-374a-5p表达量、平板克隆数、穿膜细胞数显著增加,划痕修复率、CD8^(+)T细胞凋亡率显著升高(P<0.05),TNF-α、IFN-γ、IL-4水平,CD8^(+)T细胞的杀伤率以及ARRDC3表达水平显著降低(P<0.05);与Exo-NC组和NC inhibitor组相比,miR-374a-5p inhibitor组miR-374a-5p表达量、平板克隆数、穿膜细胞数显著减少,划痕修复率、CD8^(+)T细胞凋亡率显著降低(P<0.05),TNF-α、IFN-γ、IL-4水平,CD8^(+)T细胞的杀伤率以及ARRDC3表达水平显著升高(P<0.05);与miR-374a-5p inhibitor+sh-NC组相比,miR-374a-5p inhibitor+sh-ARRDC3组的ARRDC3表达下调,TNF-α、IFN-γ、IL-4水平以及CD8^(+)T细胞的杀伤率显著降低(P<0.05),平板克隆数、穿膜细胞数显著增加,划痕修复率、CD8^(+)T细胞凋亡率和PD-L1表达水平显著升高(P<0.05)。综上所述,乳腺癌细胞来源的外泌体可通过miR-374a-5p/ARRDC3轴上调PD-L1表达,抑制肿瘤微环境中CD8^(+)T细胞的活性,进而促进癌细胞的免疫逃逸。