关键词:
外泌体
微小RNA-21
巨噬细胞
细胞焦亡
胃癌
摘要:
目的探究肿瘤细胞来源外泌体miR-21在胃癌细胞转移过程中对巨噬细胞焦亡的影响。方法培养人胃癌细胞HGC-27和人正常胃黏膜上皮细胞GES-1,提取两种细胞来源外泌体,通过qRT-PCR检测外泌体内miR-21表达水平。通过慢病毒转染细胞的方法构建稳定过表达miR-21的HGC-27细胞株及阴性对照细胞株,之后提取外泌体,并使用PKH67染料标记外泌体。根据来源细胞株不同,将外泌体分为miR-21-exo组、miR-21-mimics-exo组和miR-21-mimicsNC-exo组。使用佛波脂(PMA)诱导THP-1细胞分化为M0型巨噬细胞,并将M0型巨噬细胞分为exo-miR-21组、exo-miR-21-mimics组、exo-miR-21-mimicsNC组。加入外泌体干预处理36 h后,通过Western blot和ELISA检测巨噬细胞焦亡相关因子的表达水平。提取上述各组巨噬细胞培养上清,与HGC-27细胞共培养,划痕试验和Transwell试验检测HGC-27细胞迁移和侵袭能力。结果与GES-1细胞来源外泌体相比,miR-21在HGC-27细胞来源外泌体内高表达,差异具有统计学意义(t=12.00,P<0.001)。与exo-miR-21组和exo-miR-21-mimicsNC组相比,exo-miR-21-mimics组巨噬细胞焦亡相关因子表达水平显著升高,差异具有统计学意义(t=19.23~26.79,均P<0.0001)。与添加了exo-miR-21组和exo-miR-21-mimicsNC组巨噬细胞培养上清的HGC-27细胞相比,添加了exo-miR-21-mimics组巨噬细胞培养上清的HGC-27细胞迁移和侵袭能力显著增强,差异具有统计学意义(t_(迁移)=11.39、11.16,t_(侵袭)=10.80、9.153,均P<0.001)。结论肿瘤细胞来源外泌体miR-21能够通过诱导巨噬细胞焦亡来促进胃癌细胞转移。