关键词:
A549细胞
培美曲塞
低氧
凋亡
MRP-1
Cleaved Caspase-3
摘要:
目的 研究低氧环境对培美曲塞(PE)介导的非小细胞肺癌细胞凋亡的影响。方法 将A549细胞置于21%O2或1%O2中,给予8μmol/L PE处理48 h,分为常氧对照组、常氧溶剂组、常氧加药组、低氧对照组、低氧溶剂组、低氧加药组。台盼蓝染色法检测低氧环境与常氧环境下的细胞给予PE处理后的死亡情况;流式细胞术检测PE作用后常氧和低氧环境下细胞的凋亡率;细胞划痕实验检测PE作用后常氧和低氧环境下细胞的迁移距离;Western blot检测MRP-1、Cleaved Caspase-3、E-Cadherin、N-Cadherin表达。结果 台盼蓝染色结果显示,与常氧加药组相比,低氧环境下PE作用后的细胞死亡率下降(P<0.001)。流式细胞术结果显示,低氧和常氧环境下PE均导致细胞凋亡,但常氧加药组凋亡率显著高于低氧加药组(P<0.000 1)。细胞划痕实验结果显示,常氧和低氧环境下PE处理24 h和48 h后,A549细胞的迁移距离均小于对照组细胞(P<0.05),但常氧加药组和低氧加药组细胞的迁移距离无显著性差异。Western blot结果显示,低氧环境下PE处理的细胞中MRP-1表达明显高于常氧环境下PE处理的细胞(P<0.000 1)。与对照组比较,常氧条件下,PE作用于A549细胞后,Cleaved Caspase-3的表达上升(P<0.05),但低氧条件下,PE处理的细胞中Cleaved Caspase-3表达无明显变化。低氧和常氧环境下,PE处理的细胞中E-Cadherin表达下降(P<0.000 1、P<0.001),N-Cadherin表达降低(P<0.05、P<0.000 1),但低氧加药处理的细胞中E-Cadherin和NCadherin表达明显低于常氧加药组(均P<0.000 1)。结论 低氧可显著削弱PE对A549细胞的促凋亡效应,并阻断Cleaved Caspase-3激活;其机制可能与低氧诱导MRP-1高表达、减少药物蓄积有关。干预MRP-1或恢复凋亡通路活性可能成为克服低氧耐药的新策略。