关键词:
Src同源区2蛋白酪氨酸磷酸酶1
Spi-1原癌基因
脾酪氨酸激酶
活性氧
肿瘤相关巨噬细胞
炎症反应
乳腺癌
摘要:
目的:旨在探讨巨噬细胞中Src同源区2蛋白酪氨酸磷酸酶1(SHP-1)的表达在乳腺癌中的作用及其可能的机制。方法:利用GEO数据库进行生物信息学分析,构建裸鼠肿瘤模型检测巨噬细胞中SHP-1和Spi-1原癌基因(PU.1)过表达对肿瘤的影响,将人单核细胞系THP-1细胞经过不同刺激分为6组:NC组、SHP-1-OE组、NC组+SP1抑制剂组、SHP-1-OE+SP1抑制剂组、NC组+SP1抑制剂+SYK抑制剂组和SHP-1-OE+SP1抑制剂+SYK抑制剂组,与乳腺癌细胞MCF-7共培养,通过免疫印迹检测THP-1细胞中SHP-1、核SP1、DNA甲基转移酶-1(DNMT1)、PU.1和磷酸化脾酪氨酸激酶(p-SYK)蛋白表达水平,RT-qPCR检测THP-1细胞氧化应激水平及M1、M2巨噬细胞极化情况,TUNEL检测肿瘤细胞凋亡水平。结果:生信分析结果显示,SHP-1抑制活性氧(ROS)表达,SP1促进DNMT1表达。相较于对照组,SHP-1过表达的裸鼠移植瘤明显增大,PU.1过表达后裸鼠移植瘤明显缩小。与对照组相比,SHP-1过表达组核SP1、DNMT1、精氨酸酶1和CD206的表达明显升高,PU.1、p-SYK、NAPDH氧化酶2(NOX2)、NAPDH氧化酶4(NOX4)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达明显降低;加入SP1抑制剂后,核SP1、DNMT1、精氨酸酶1和甘露糖受体(CD206)的表达明显降低,PU.1、p-SYK、NOX2、NOX4、IL-1β、TNF-α的表达明显升高;加入SP1抑制剂和SYK抑制剂后精氨酸酶1和CD206的表达明显升高,NOX2、NOX4、IL-1β、TNF-α的表达明显降低。SHP-1过表达显著降低了肿瘤细胞凋亡率,加入SP1抑制剂后,肿瘤细胞凋亡率显著上升,加入SP1抑制剂和SYK抑制剂后肿瘤细胞凋亡率显著下降。结论:肿瘤相关巨噬细胞中SHP-1过表达促进SP1/DNMT1信号通路的激活,进而下调PU.1和SYK的表达,并抑制氧化应激导致的炎症反应,从而促进乳腺癌的进程。