关键词:
膀胱癌
斑点型POZ蛋白-转录激活因子3轴
肿瘤干性
肿瘤相关巨噬细胞
M2型极化
泛素化降解
摘要:
目的探究斑点型POZ蛋白(SPOP)通过调控信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路, 在膀胱癌(BC)细胞肿瘤干性维持及肿瘤相关巨噬细胞(TAM)极化中的作用及分子机制。方法选取2025年1月至2025年8月嘉兴大学附属第二医院体外培养人膀胱癌细胞系(5637、T24、SW780)与单核细胞系U937建立体外共培养体系, 通过RNA干扰、过表达技术调控SPOP及STAT3表达。运用球形成实验评估肿瘤干性;细胞计数试剂盒-8法(CCK-8)法检测细胞增殖活性;双荧光素酶报告实验、染色质免疫沉淀(ChIP)、免疫共沉淀(Co-IP)及体外泛素化实验, 明确SPOP与STAT3的相互作用及调控模式;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测趋化因子、细胞因子及干性相关分子表达;免疫荧光染色观察巨噬细胞极化表型。组织之间的比较行配对设计或独立样本t检验, 多组间的比较行单因素方差分析。结果膀胱癌细胞(BC细胞)与正常膀胱上皮细胞组间SPOP表达水平比较, 差异有统计学意义(0.32±0.05、0.11±0.02、0.21±0.04比1.00±0.08, F=98.65, P<0.001);SPOP低表达组成球率、M2型极化率高于高表达组[(68.25±5.32)%比(21.56±3.18)%、(75.36±6.28)%比(28.45±4.16)%, t=15.89、16.93, P<0.001]。SPOP沉默组STAT3蛋白水平高于空白对照组, SPOP过表达组低于空白对照组(1.95±0.12比1.00±0.06、0.32±0.04比1.00±0.06, t=15.82、24.38, P<0.001);STAT3泛素化水平SPOP 5 μg/ml组高于1 μg/ml组[(0.89±0.07)比(0.21±0.03), t=22.65, P<0.001]。SPOP沉默组CCL2分泌量、M2极化率高于空白对照组[(428.65±35.72) pg/ml比(112.36±9.85) pg/ml、(78.65±6.32)%比(26.35±3.89)%, t=22.89、20.98, P<0.001];SPOP沉默联合STAT3沉默组上述指标低于SPOP沉默组[(108.63±10.25) pg/ml比(428.65±35.72) pg/ml、(25.89±3.65)%比(78.65±6.32)%, t=24.05、21.67, P<0.001]。M2巨噬细胞IL-6分泌量高于未极化巨噬细胞[(396.58±32.45) pg/ml比(65.32±7.18) pg/ml, t=31.65, P<0.001];M2上清处理组BC细胞p-STAT3、成球率高于空白对照组[2.89±0.25比1.00±0.07、(72.36±6.15)%比(23.58±3.26)%, t=22.58、24.89, P<0.001];M2上清联合IL-6中和抗体/STAT3抑制剂组上述指标低于M2上清单独组[1.05±0.08比2.89±0.25、(24.95±3.46)%比(72.36±6.15)%, t=21.96、24.02, P<0.001]。VEZF1过表达组SPOP表达、成球率低于/高于空白对照组[0.25±0.04比1.00±0.07、(70.25±6.18)%比(22.65±3.32)%, t=20.98、23.89, P<0.01];VEZF1与SPOP协同下调组STAT3激活水平、CCL2分泌量、M2极化率高于非协同下调组[2.92±0.26比1.05±0.09、(415.36±36.28) pg/ml比(118.65±10.32) pg/ml、(76.85±6.42)%比(27.36±3.95)%, t=22.36、24.52、21.96, P<0.01]。结论 SPOP通过靶向泛素化降解STAT3, 调控CCL2/IL-6信号轴, 双向调控BC细胞肿瘤干性与TAM极化, VEZF1-SPOP-STAT3轴是膀胱癌恶性进展的关键调控通路。