关键词:
肿瘤微环境
抗体筛选
pH梯度
Biacore
摘要:
常规抗体筛选主要基于生理pH条件进行亲和力评估和筛选,可能忽略了肿瘤微环境酸性特征对抗体结合作用的影响。研究旨在建立多pH梯度筛选策略,通过模拟肿瘤微环境条件,筛选出酸性pH条件下保持高亲和力与稳定性的5T4抗体克隆,提升抗体开发的临床转化成功率。选取前期筛选得到的5T4杂交瘤克隆,上清抗体经浓度定量后,利用Biacore T200系统构建多pH梯度(7.4、7.0、6.6、6.0、5.5)实验体系,采用表面等离子共振技术实时监测抗体亲和力动态变化。结果发现,常规生理条件下筛选的高亲和力抗体5T4-15,在酸性环境中亲和力随pH降低呈逐步下降趋势,至pH 5.5时丧失与抗原的结合能力。相比之下,经pH 5.5压力筛选获得的抗体5T4-45,在pH 7.4~6.0的肿瘤微环境相关区间内均能保持稳定的高亲和力,展现出卓越的酸性环境适应性。在抗体初筛阶段引入酸性压力测试(pH 5.5),可有效鉴别并筛选出肿瘤微环境适应性抗体,突破常规生理pH筛选高亲和力抗体的局限性,并提升优质候选分子的筛选效率,为开发临床转化潜力更高的实体瘤治疗性抗体提供新策略。