关键词:
胃癌
胃肠安
肿瘤
选择性剪接
健脾
裸小鼠
中药研究
摘要:
目的探讨健脾中药复方胃肠安(WCA)通过多聚嘧啶结合蛋白3(PTBP3)调控分化抑制因子1(Id1)mRNA选择性剪接抑制胃癌细胞恶性进展的作用机制。方法利用PTBP3基因被稳定沉默的人胃癌细胞MKN45,建立相应的裸小鼠皮下移植瘤模型。模型裸小鼠随机分为MKN45细胞0.9%氯化钠溶液组(NC组,作为对照),MKN45细胞WCA组(NC-WCA组),沉默PTBP3 MKN45细胞0.9%氯化钠溶液组(shPTBP3组),沉默PTBP3 MKN45细胞WCA组(shPTBP3-WCA组),每组6只。每日灌胃给予相应干预,共28 d。考察WCA对移植瘤生长、PTBP3及Id1异构体表达的影响。采用苏木精-伊红(HE)染色法和Ki67染色法分别观察肿瘤组织形态和肿瘤细胞比例。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法和Western blot法检测移植瘤细胞内PTBP3、Id1a、Id1b蛋白和mRNA表达。结果与NC组相比,NC-WCA组、shPTBP3组、shPTBP3-WCA组小鼠瘤体质量均减轻,差异有统计学意义(P<0.05)。HE和Ki67染色提示沉默PTBP3和WCA干预均可抑制小鼠MKN45肿瘤细胞增殖能力。RT-qPCR和Western blot结果显示,与NC组相比,沉默PTBP3和WCA干预均能使Id1a mRNA表达减少,Id1b mRNA表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05);在沉默PTBP3的模型裸小鼠中,WCA干预后Id1a mRNA表达减少,Id1b mRNA表达增加,差异均有统计学意义(P<0.001);与NC组相比,沉默PTBP3和WCA干预均能下调Id1a表达(P<0.05),并上调Id1b表达(P<0.001),其蛋白表达变化与mRNA表达变化一致。结论PTBP3能调控Id1异构体的选择性剪接,中药复方WCA通过PTBP3调控Id1的选择性剪接,使Id1a表达下调、Id1b表达上调,从而抑制胃癌细胞恶性进展。