关键词:
非小细胞肺癌
苦参
土茯苓
肿瘤免疫治疗
型干扰素
巨噬细胞
作用机制
中药研究
摘要:
目的探究苦参-土茯苓作为一种潜在的固有免疫调节剂在非小细胞肺癌治疗中的作用及分子机制。方法采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测苦参-土茯苓对非小细胞肺癌A549细胞活力的影响。分别使用苦参-土茯苓、干扰素刺激DNA(ISD)、环状GMP-AMP(cGAMP)、脂多糖(LPS)、聚肌苷酸[poly(I:C)]处理C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测其Ⅰ型干扰素[CXC趋化因子配体10(CXCL10)、β干扰素(IFN-β)、白细胞介素-6(IL-6)]mRNA的表达。使用TANK结合激酶1(TBK1)抑制剂(TBK1-IN-1)和苦参-土茯苓处理A549细胞,分别采用RT-qPCR法和Western blot法检测A549细胞中Ⅰ型干扰素蛋白及其mRNA的表达。使用苦参-土茯苓或苦参-土茯苓+TBK1抑制剂处理A549细胞后,采用Western blot法检测TBK1、磷酸化TBK1(p-TBK1)、干扰素调节因子3(IRF3)、磷酸化IRF3(p-IRF3)蛋白的表达。结果CCK-8结果显示苦参-土茯苓能够抑制A549细胞增殖,其半抑制浓度(IC50)为103.2 g/L。在野生型小鼠腹腔巨噬细胞及A549细胞中,苦参-土茯苓各组Ⅰ型干扰素mRNA的表达水平明显高于对照组(P<0.05);ISD、cGAMP能够增强苦参-土茯苓诱导Ⅰ型干扰素mRNA表达的作用(P<0.05),而LPS和poly(I:C)对该作用无明显影响(P>0.05)。在环鸟腺苷酸合成酶基因(cGAS)敲除(cGAS−/−)和干扰素激活蛋白基因(STING)敲除(STING−/−)的小鼠腹腔巨噬细胞中,敲除cGAS和STING并未影响苦参-土茯苓诱导Ⅰ型干扰素表达(P>0.05)。在经TBK1抑制剂处理的A549细胞中,苦参-土茯苓组Ⅰ型干扰素的表达高于对照组及TBK1抑制剂+苦参-土茯苓组,差异有统计学意义(P<0.05)。苦参-土茯苓能明显提高TBK1、IRF3蛋白的表达和磷酸化水平(P<0.05,P<0.01),且该作用能被TBK1抑制剂抑制(P<0.01)。结论苦参-土茯苓能够抑制非小细胞肺癌细胞增殖,其作用机制可能通过调控cGAS-STING通路的TBK1,从而激活Ⅰ型干扰素反应调控抗肿瘤免疫应答。