关键词:
白藜芦醇
三阴性乳腺癌
肿瘤相关脂肪细胞
无翅基因相关整合位点/β-连环蛋白信号通路
摘要:
目的探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)是否能通过肿瘤相关脂肪细胞(cancer-associated adipocytes,CAA)调控无翅基因相关整合位点(wingless-type MMTV integration site family,Wnt)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路影响三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231系的细胞增殖、迁移和侵袭能力。方法用不同浓度(25、50、100μmol/L)的Res处理MDA-MB-231细胞,培养24、48、72 h后采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)验证Res对细胞增殖的影响;采用定量聚合酶链式反应(quantitative-polymerase chain reaction,qPCR)检测脂肪标志物水平;取对数生长期的MDA-MB-231细胞分为阳性对照组、阴性对照组、CAA-CM组、Adi-CM组、CAA-CM+Res组。将15只BALB/c小鼠根据有无高脂及Res饮食分为对照组、高脂饲料组、高脂饲料+Res组。采用划痕试验和Transwell试验验证Res对MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的影响。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色验证Res对CAA的影响;采用Western blot及免疫组织化学法验证Res对CAA的β-catenin、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达水平的影响。结果①与Res浓度25μmol/L比较,48、72 h时100μmol/L浓度的细胞存活数下降(P均<0.05);与Res浓度50μmol/L比较,72 h时100μmol/L浓度的细胞存活数下降(P<0.05)。与24 h比较,48、72 h不同Res浓度时细胞存活数均下降(P均<0.05);与48 h比较,72 h Res浓度25、100μmol/L时细胞存活数下降(P均<0.05)。②与前脂肪细胞相比,成熟脂肪细胞的激素敏感脂肪酶(hormone-sensitive lipase,HSL)、前脂肪因子-1(preadipocyte factor-1,Pref-1)mRNA水平降低,过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPAR-γ)、CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT enhancer-binding proteinα,C/EBP-α)mRNA水平升高(P均<0.01)。而成熟脂肪细胞用Transwell小室与MDA-MB-231细胞共培养后,与成熟脂肪细胞相比,CAA的HSL、Pref-1 mRNA水平升高,PPAR-γ、C/EBP-αmRNA水平降低(P均<0.01);且CAA的炎性因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、趋化因子配体2(C-C motif chemokine ligand 2,CCL2)和C-X-C基序趋化因子配体8(C-X-C motif chemokine ligand 8,CXCL8)mRNA水平升高(P均<0.01)。③不同组别细胞迁移率及侵袭细胞数比较差异均有统计学意义(P均<0.001)。与阳性对照组相比,阴性对照组、CAA-CM组、Adi-CM组以及CAA-CM+Res组细胞迁移率及侵袭细胞数均减少(P均<0.05);与阴性对照组比较,CAA-CM组、Adi-CM组细胞迁移率及侵袭细胞数增加,CAA-CM+Res组侵袭细胞数增加(P均<0.05);与CAA-CM组比较,Adi-CM组侵袭细胞数减少,CAA-CM+Res组细胞迁移率及侵袭细胞数均减少(P均<0.05);与Adi-CM组比较,CAA-CM+Res组细胞迁移率及侵袭细胞数均减少(P均<0.05)。④与对照组相比,高脂饲料组小鼠有成熟的皮下脂肪细胞,直径增大(P<0.05);而采用Res干预后,与高脂饲料组相比,高脂饲料+Res组乳腺CAA直径减小(P<0.05)。⑤与对照组相比,高脂饲料组小鼠β-catenin以及Cyclin D1蛋白表达水平升高,高脂饲料+Res组小鼠β-catenin以及Cyclin D1蛋白表达水平降低(P均<0.05)。与高脂饲料组相比,高脂饲料+Res组小鼠β-catenin以及Cyclin D1蛋白表达水平降低(P均<0.05)。结论Res通过CAA调控Wnt/β-catenin信号通路抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭。