关键词:
蟾毒它灵
非小细胞肺癌
EGFR
网络毒理学
肾毒性
摘要:
目的研究蟾毒它灵对非小细胞肺癌细胞及裸鼠的抗肿瘤活性,并探讨蟾毒它灵的肾毒性及其潜在机制。方法①体外试验:以0、100、150、200、250、300、350、400、450 nmol·L^(−1)蟾毒它灵干预A549细胞24、48、72 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖;100、200、300 nmol·L^(−1)蟾毒它灵干预后,通过细胞划痕试验检测A549细胞迁移能力;②体内试验:通过裸鼠右侧腋下注射A549细胞构建非小细胞肺癌荷瘤裸鼠模型,随机分成空白组和蟾毒它灵低、中、高剂量组,每组6只。记录裸鼠体质量变化及皮下移植瘤瘤体抑制率,并进行瘤体及肾脏HE染色、检测血清中肾损伤指标,采用Western blotting检测瘤体的EGFR、Bax、Bcl-2表达情况。③网络毒理学与分子对接:用CTD比较毒物遗传学数据库预测蟾毒它灵毒性作用靶点,通过GeneCards、OMIM数据库收集肾毒性相关靶点,获得两者交集靶点;对交集靶点构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,并进行GO和KEGG富集分析;之后对关键靶点进行分子对接和可视化分析;④通过qRT-PCR验证网络毒理学预测的肾毒性靶点。结果①CCK-8结果表明,蟾毒它灵抑制A549细胞的效果呈浓度和时间依赖性;与空白组相比,各蟾毒它灵给药组细胞划痕愈合率显著降低。②与空白组相比,蟾毒它灵给药组裸鼠显著抑制非小细胞肺癌瘤体增长,且呈剂量依赖性;高剂量组瘤体HE染色出现细胞密度降低、细胞皱缩等典型凋亡形态学增多;Western blotting结果表明,与空白组相比,蟾毒它灵给药组EGFR及Bcl-2/Bax蛋白表达下调。③网络毒理学共获得201个蟾毒它灵肾毒性潜在靶点;分子对接结果显示,蟾毒它灵与TP53、TNF、AKT1、IL-6、STAT3靶点具有较好的结合活性。④与空白组相比,各给药组TP53、TNF和IL-6 mRNA表达显著上调,蟾毒它灵中、高剂量组STAT3和AKT1 mRNA表达显著上调。结论蟾毒它灵可能通过抑制EGFR表达来抑制非小细胞肺癌增殖、迁移,且其可能通过调控TP53、TNF、AKT1、IL-6、STAT3产生一定的肾毒性。