关键词:
羟丙基壳聚糖
油酸
大麻二酚
聚合物胶束
SKOV3细胞
水溶性
细胞摄取
细胞迁移
抗肿瘤
摘要:
目的通过接枝反应将油酸(OA)修饰于羟丙基壳聚糖(HPCS)分子链,合成HPCS/OA聚合物载体,制备大麻二酚纳米胶束(CBD-HPCS/OA-NMs),并研究其抗肿瘤活性。方法以粒径、多分散系数(PDI)、Zeta电位为评价指标,采用单因素实验筛选HPCS/OA空白纳米胶束的制备方法,通过核磁共振氢谱(1H-NMR)、傅里叶红外光谱(FT-IR)表征其结构,并测定其临界胶束浓度(CMC)。采用透析法制备CBD-HPCS/OA-NMs,测定其粒径、PDI、Zeta电位、包封率、载药量、溶解度等关键理化性质;通过透射电镜(TEM)观察其形貌;评价胶束在模拟生理环境与细胞培养环境中的体外稳定性,以及体外释药行为;通过溶血性实验考察生物安全性,CCK-8法评估CBD-HPCS/OA-NMs对SKOV3卵巢癌细胞的增殖抑制作用;借助荧光显微镜分析SKOV3细胞对CBD-HPCS/OA-NMs的摄取情况;通过细胞划痕实验考察CBD-HPCS/OA-NMs对SKOV3细胞迁移能力的影响,初步阐明其抗肿瘤作用。结果成功合成HPCS/OA聚合物载体,其最优处方工艺为:OA用量0.6 mL、反应时间6 h、反应温度60℃,此条件下制备的HPCS/OA空白纳米胶束CMC为0.0102 mg·mL^(-1)。透射电镜下CBD-HPCS/OA-NMs呈规则球形,粒径、PDI、Zeta电位分别为(194.80±1.2)nm、0.27±0.01、(39.13±3.46)m V,包封率为(72.85±0.37)%,载药量为(29.14±0.21)%,其在水中的溶解度为290μg·mL^(-1),相较于游离CBD提高了近743倍;稳定性实验结果表明,CBD-HPCS/OA-NMs在模拟生理与细胞培养环境中储存168 h粒径均无显著变化(P>0.05),提示胶束稳定性良好;溶血性实验结果表明CBD-HPCS/OA-NMs有较小的溶血率,生物相容性好;CCK-8结果显示,HPCS/OA空白纳米胶束无细胞毒性,给药24 h后CBD-HPCS/OA-NMs对SKOV3细胞的半数抑制浓度(IC50)为8.51μg·mL^(-1);荧光显微镜观察证实,SKOV3细胞对CBD-HPCS/OA-NMs的摄取效率显著强于游离CBD;细胞划痕实验表明,CBD-HPCS/OA-NMs对SKOV3细胞迁移的抑制效果显著优于游离CBD(P<0.05)。结论制备的CBDHPCS/OA-NMs能有效改善CBD的水溶性与稳定性,兼具良好生物安全性与体外抗肿瘤活性。