关键词:
2-己基-4-戊炔酸
乳腺肿瘤
肿瘤微环境
巨噬细胞
CD8+T淋巴细胞
肺转移
摘要:
目的探讨2-己基-4-戊炔酸(HPTA)对乳腺肿瘤生长和肺转移的抑制作用及免疫调控机制。方法(1)体内实验:雌性BALB/c小鼠接种荧光素酶标记的小鼠乳腺癌细胞系4T1-Luc建立原位乳腺移植瘤模型,随后分为对照组和HPTA组,HPTA组小鼠ip给予HPTA 20 mg·kg^(-1),对照组小鼠ip给予等体积PBS,每天2次,连续6 d。定期测量肿瘤体积(每2天1次);活体成像系统检测肺部肿瘤转移情况,以验证乳腺肿瘤自发肺转移模型建立成功;HE染色观察肿瘤和肺组织病理变化、肺转移灶数量及面积占比;Bouin′s染色检测肺转移灶数量;通过生存分析(生存时间、中位生存时间、风险比和95%置信区间)比较对照组与HPTA组小鼠的存活情况;免疫组化检测小鼠原位瘤中分化簇80(CD80)、CD34、F4/80、颗粒酶B(Granzyme B)、CD206、Ki67、CD8和整合素αM(CD11b)及小鼠肺组织中CD34、Ki67、精氨酸酶1(Arg-1)、F4/80、Granzyme B、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、CD8和CD11b的表达;Western印迹法检测小鼠肿瘤中iNOS和Arg-1蛋白表达;RT-qPCR检测小鼠肿瘤中CD206、白细胞介素10(IL-10)、IL-12、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、CD80、Arg-1、C-X-C基序趋化因子配体9/10/11(CXCL9/10/11)及肺组织中CD206、IL-10、Arg-1、CD80、IL-12、iNOS、TNF-α、CXCL9、CXCL10和CXCL11 mRNA表达。(2)体外实验:采用肿瘤条件培养基(TCM)培养小鼠单核巨噬细胞白血病细胞系RAW264.7,将其分为对照组和HPTA 15μmol·L^(-1)组,培养24 h,分别收集细胞及上清,并将其上清记为TCM条件下的巨噬细胞条件培养基(M-TCM)和M-TCM+HPTA。RT-qPCR检测细胞CD163、CD206、IL-10、CD80、CD86、IL-12及CXCL9/10/11 mRNA表达;Western印迹法检测CXCL9/10/11蛋白表达。采用DMEM培养RAW264.7细胞,将其分为对照组和HPTA 15μmol·L^(-1)组,培养24 h,收集上清分别记为DMEM条件下的巨噬细胞条件培养基(M-DMEM)和M-DMEM+HPTA。将人乳腺癌细胞系MCF-7细胞接种于6孔板,分为M-TCM、M-TCM+HPTA、M-DMEM和M-DMEM+HPTA组,各组分别加入相应上清孵育24/48 h,划痕实验检测MCF-7细胞划痕愈合情况。结果(1)与对照组相比,HPTA组小鼠肿瘤和肺光信号强度及质量均显著降低;肿瘤和肺转移灶中Ki67和CD34表达水平显著降低;肺转移灶数量和面积占比显著降低;小鼠生存期显著延长。与对照组相比,HPTA组小鼠肿瘤中F4/80、CD11b、CD80、CD8、iNOS和Granzyme B表达水平显著升高,CD206和Arg-1表达水平显著降低;小鼠肺转移灶中F4/80、CD11b、iNOS、CD8和Granzyme B表达水平显著升高,Arg-1表达水平显著降低;小鼠肿瘤和肺转移灶中CD206、IL-10和Arg-1的mRNA水平显著降低,CD80、TNF-α、IL-12、CXCL9、CXCL10和CXCL11的mRNA水平显著升高。(2)与对照组相比,HPTA组巨噬细胞CD80、CD86、IL-12、CXCL9、CXCL10和CXCL11 mRNA表达水平显著升高,CXCL9、CXCL10和CXCL11蛋白表达水平显著升高,CD163、CD206和IL-10 mRNA表达水平显著降低。与M-TCM组相比,M-TCM+HPTA组MCF-7细胞划痕愈合速度显著减小。结论HPTA可能通过激活M1型巨噬细胞所介导的免疫反应发挥抑制乳腺癌原位肿瘤生长与肺转移。