关键词:
人甲状腺髓样癌TT细胞
蛋白激酶B(AKT)抑制剂MK-2206
B-RAF抑制剂RAF265
信号通路
摘要:
目的 探讨蛋白激酶B(AKT)抑制剂MK-2206、B-RAF抑制剂RAF265对人甲状腺髓样癌细胞系TT细胞增殖、凋亡和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/AKT、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响,分析两者对抗甲状腺髓样癌(MTC)肿瘤活性的意义及联合应用是否具有协同作用。方法 将TT细胞进行体外培养,随机分为对照组、MK-2206(1、5、10、15、20、25μmol/L)组、RAF265(0.01、0.05、0.10、0.50、1.00、2.00μmol/L)组,分别以不同浓度干预24、48、72 h后,采用CCK-8法检测细胞活性,倒置显微镜观察细胞形态,筛选MK-2206和RAF265干预TT细胞半抑制浓度(IC50)及作用时间。依据上述实验结果,将TT细胞随机分为对照组、MK-2206组(7.848μmol/L)、RAF265组(5.807μmol/L)、MK-2206(7.848μmol/L)+RAF265(5.807μmol/L)联用组,干预TT细胞72 h后,采用台盼蓝染色观察细胞活力变化、流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期变化; Western印迹法检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)、p-ERK、AKT、p-AKT、VEGFR2、p-VEGFR2蛋白表达。结果 与对照组相比,MK-2206组、RAF265组TT细胞凋亡率、G0/G1期、S期荧光强度显著升高,G2/M期、p-AKT、p-ERK、p-VEGFR2及VEGFR2蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。与MK-2206、RAF265单用组相比,联合处理可显著降低G2/M期及S期荧光强度、p-VEGFR2、p-AKT、p-ERK、VEGFR2蛋白表达,显著升高TT细胞凋亡率、G1期荧光强度(P<0.05,P<0.01)。结论AKT抑制剂MK-2206、BRAF抑制剂RAF265能够分别抑制PI3K/AKT、MAPK信号轴,进而抑制TT细胞增殖活性、凋亡、细胞周期,且二者联合应用具有协同作用。