关键词:
DDR1
生物信息学
克隆
质粒
测序
免疫印迹
蛋白表达
肿瘤
摘要:
[目的]盘状结构域受体1(DDR1)蛋白生物信息学分析及其真核表达载体的构建。[方法]从NCBI获取人源DDR1蛋白序列,使用生信软件分析其结构和理化性质。以BC013400.2克隆载体为模板,PCR扩增DDR1基因序列,将其克隆至pIRES-EGFP载体构建pIRES-EGFP-DDR1重组体,经酶切和测序验证后,转染至ACHN和786-O细胞,免疫印迹检测DDR1蛋白的表达。[结果]生信学软件预测DDR1蛋白相对分子质量为101 127.64 Da,等电点为6.38,蛋白不稳定指数为47.39,亲水性平均系数为-0.248。913个氨基酸中,416个位于细胞膜外,23个在跨膜区,474个在细胞膜内。二级结构以无规卷曲(58.49%)为主,辅以α螺旋(20.70%)、延伸链(16.54%)和β转角(4.27%)。pIRES-EGFP-DDR1重组体经酶切后得到约5 300 bp和2 700 bp片段,测序结果与已知序列吻合。免疫印迹证实重组质粒可在ACHN和786-O细胞中特异表达。[结论] DDR1为亲水性、不稳定的跨膜蛋白,二级结构以无规卷曲为主,成功构建了DDR1真核表达载体。