关键词:
结肠炎,溃疡性
维生素K2
炎症相关结直肠癌
基质Gla蛋白
摘要:
目的探索维生素K2(VitK2)调控基质Gla蛋白(MGP)抑制炎症相关结直肠癌(CAC)模型小鼠肿瘤生长的机制。方法选取C57BL/6雄性小鼠26只,6~8周龄,体质量20~25 g,按照随机数字表法分为4组(各组予以不同的处理方式):正常组(予以橄榄油灌胃、生理盐水腹腔注射)(n=5)、模型组[予以橄榄油灌胃、氧化偶氮甲烷(AOM)腹腔注射、葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液饮用处理](n=5)、30 mg组(予以30 mg·kg^(-1)·d^(-1)的VitK2灌胃、AOM腹腔注射及DSS溶液饮用处理)(n=8)、60 mg组(予以60 mg·kg^(-1)·d^(-1)的VitK2灌胃、AOM腹腔注射及DSS溶液饮用处理)(n=8),第12周末处死小鼠,比较各组小鼠结肠肿瘤的个数及长径,利用免疫组织化学染色(IHC)法检测结肠组织核增殖抗原(Ki-67)表达水平、Western蛋白印迹(WB)法检测MGP及Smad1/5通路相关蛋白的表达情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测MGP mRNA的表达情况。根据处理方式的不同,将结肠癌上皮细胞系SW480细胞分为对照组[用二甲基亚砜(DMSO)处理]、100μmol/L组(用100μmol/L的VitK2处理)、200μmol/L组(用200μmol/L的VitK2处理)、400μmol/L组(用400μmol/L的VitK2处理)、空载组(用空载质粒转染SW480细胞)及MGP过表达组(用MGP过表达的质粒转染SW480细胞),处理48 h后检测MGP蛋白表达、Smad1/5通路相关蛋白的变化情况及处理后不同时间点(24、48、72及96 h)各组细胞增殖情况。结果模型组、30 mg组及60 mg组小鼠均有结直肠成瘤表现,成瘤率为100%(17/17)。30 mg组及60 mg组结肠肿瘤的个数与模型组差异均无统计学意义(均P>0.05),瘤体的长径均小于模型组(均P<0.05);30 mg组及60 mg组肿瘤的个数和长径差异均无统计学意义(均P>0.05)。30 mg组及60 mg组Ki-67蛋白表达水平均低于模型组(均P<0.05);MGP蛋白表达水平及pSmad1/5蛋白表达水平均高于模型组(均P<0.05);30 mg组及60 mg组MGP mRNA水平与模型组差异均无统计学意义(均P>0.05);30 mg组及60 mg组Ki-67蛋白、MGP蛋白、pSmad1/5蛋白及MGP mRNA表达水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。细胞实验中,100μmol/L组MGP及pSmad1/5蛋白表达水平与对照组差异均无统计学意义(均P>0.05),200μmol/L组及400μmol/L组MGP及pSmad1/5蛋白表达水平均高于对照组(均P<0.001);72及96 h后,200μmol/L组及400μmol/L组细胞增殖能力均低于对照组(均P<0.001)。MGP过表达组pSmad1/5蛋白表达水平高于空载组(P<0.001);24、48、72及96 h后,MGP过表达组细胞增殖能力均低于空载组(均P<0.001)。结论VitK2可能通过促进MGP蛋白表达,激活Smad1/5通路,进一步抑制CAC模型小鼠肿瘤生长。