关键词:
附子多糖
仑伐替尼
巨噬细胞
肝细胞癌
摘要:
探讨附子多糖联合仑伐替尼在调控肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)极化从而增强抗肝细胞癌疗效中的作用。采用CCK-8筛选附子多糖和仑伐替尼对RAW264.7细胞的无毒浓度;构建RAW264.7细胞与Hepa1-6肝癌细胞共培养体系,流式细胞术检测巨噬细胞M1、M2表型变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测M1型相关因子诱导型一氧化氮合酶(iNos)、白细胞介素-12b(IL-12b)及M2型相关因子精氨酸酶1(Arg-1)、白细胞介素-10(IL-10)的mRNA表达水平;EdU染色、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验及Annexin V/PI双染流式细胞术评估附子多糖联合仑伐替尼处理后的巨噬细胞对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响;建立C57BL/6小鼠肝癌皮下移植瘤模型,观察各组瘤体生长、体质量、脾脏指数、肿瘤浸润巨噬细胞极化状态。CCK-8结果表明50~200 mg·L^(-1)附子多糖、1~5μmol·L^(-1)仑伐替尼对RAW264.7巨噬细胞无抑制作用;流式细胞术及qRT-PCR结果显示,200 mg·L^(-1)附子多糖+仑伐替尼显著提高M1型巨噬细胞比例(P<0.01)及M1/M2比值(P<0.01),上调M1型相关基因iNos、IL-12b表达(P<0.01),降低M2型巨噬细胞比例(P<0.01),并抑制M2型相关基因Arg-1、IL-10表达(P<0.01);功能实验结果表明附子多糖+仑伐替尼组巨噬细胞可抑制Hepa1-6细胞增殖(P<0.01)、促进凋亡(P<0.01),并降低迁移和侵袭能力(P<0.01)。在体内实验中,与仑伐替尼单药组相比,附子多糖+仑伐替尼组瘤体体积显著减小(P<0.05),脾脏指数显著升高(P<0.05),且未引起体质量下降,瘤内M1型巨噬细胞比例及M1/M2比值显著升高(P<0.01)。综上,附子多糖联合仑伐替尼可通过促进肿瘤相关巨噬细胞M1极化增强抗肝细胞癌效应。