关键词:
乳腺癌
阿霉素耐药
细胞外囊泡
肿瘤血管生成
摘要:
目的 探究乳腺癌阿霉素(adriamycin, ADR)耐药细胞分泌的细胞外囊泡(extracellular vesicles, EVs)对肿瘤微环境相关血管内皮细胞的调控作用及其分子机制。方法 体外构建乳腺癌敏感细胞株(MCF-7)及其ADR耐药株(MCF-7-ADR),通过试剂盒法提取细胞上清液EVs;采用PKH67荧光标记示踪技术验证人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)对EVs的内吞作用;通过集落形成试验、划痕试验及成环试验系统评估EVs对HUVEC增殖、迁移及血管生成能力的影响;Western blot检测CD31蛋白质的表达水平;ELISA法检测细胞上清液血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的表达水平;基于微小RNA(microRNA,miRNA)测序技术筛选耐药细胞分泌的EVs中差异表达的miRNA。结果 与敏感株相比,耐药株分泌的EVs显著增强HUVEC的增殖能力(集落数增加了38.7%,P=0.011)、迁移能力(划痕愈合率提高了42.3%,P=0.004)及成环能力(4 h和16 h管状结构形成率分别增加了1.8倍和2.3倍,P值分别为0.044和0.010)。Western blot检测结果显示,与敏感株相比,耐药株分泌的EVs的CD31表达水平增加了1.85倍(P=0.039);ELISA法检测结果显示,VEGF的表达水平增加了2.12倍(P=0.012)。miRNA测序鉴定出差异表达的miRNA表达谱。结论 乳腺癌ADR耐药细胞通过分泌富含特定miRNA的EVs,显著增强血管内皮细胞的增殖、迁移及血管生成功能,其机制可能与EVs介导的CD31/VEGF蛋白表达上调相关,提示耐药细胞通过EVs重塑肿瘤血管微环境,可能成为乳腺癌化疗耐药的新治疗靶点。