关键词:
肿瘤坏死因子α
白细胞介素1β
脐带间充质干细胞
缺血创面
双蒂皮瓣
预处理
创面修复
摘要:
目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)预处理人脐带间充质干细胞(hUMSC)对大鼠缺血创面愈合的影响。方法该研究为实验研究。收集2022年12月—2023年4月在遵义医科大学附属医院接受剖宫产的3名22~35岁产妇分娩的健康足月新生儿脐带组织,分离hUMSC,进行划痕试验后,按随机数字表法(分组方法下同)分为用终质量浓度均为20 ng/mL的TNF-α和IL-1β预处理的预处理组及常规培养的对照组,计算划痕后8、16、32 h细胞迁移率(样本数为3)。取5只9周龄雄性SD大鼠,在背部构建面积为11.0 cm×2.5 cm的双蒂皮瓣,在皮瓣上构建2个直径0.6 cm的缺血创面,在背部正常皮肤上构建2个直径0.6 cm的非缺血创面,计算2种创面建模后6、12、18 d愈合率,确定该缺血创面模型可靠性。另取15只9周龄雄性SD大鼠,同前制备缺血创面模型,分为预处理hUMSC组、常规hUMSC组及磷酸盐缓冲液(PBS)组,每组5只,分别于创缘注射同前预处理的hUMSC、常规培养的hUMSC及PBS。计算注射后3、6、9、12 d创面愈合率;注射后12 d,取创面组织,行苏木精-伊红染色后观察创面上皮化程度,行Masson染色后观察创面组织中胶原纤维形成情况,行免疫荧光染色检测创面组织中血管数量及精氨酸酶-1(Arg1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)阳性细胞数。结果划痕后16、32 h,预处理组细胞迁移率均明显高于对照组(Z值分别为-2.61、-2.61,P<0.05)。建模后6、12、18 d,大鼠非缺血创面愈合率均明显高于缺血创面(Z值分别为2.61、2.79、2.79,P<0.05)。注射后6、9、12 d,预处理hUMSC组大鼠创面愈合率分别为6.83%(3.13%,12.22%)、66.83%(60.09%,95.68%)、96.98%(91.67%,99.80%),均明显高于PBS组的1.54%(0.30%,3.47%)、1.54%(0.60%,5.90%)、3.08%(0.90%,7.64%),Z值分别为7.60、9.40、10.00,P<0.05。注射后9 d,预处理hUMSC组大鼠创面愈合率明显高于常规hUMSC组的5.86%(4.72%,8.12%),Z=5.60,P<0.05。注射后12 d,预处理hUMSC组大鼠创面已基本完成上皮化,创面组织中胶原纤维形成情况明显优于常规hUMSC组和PBS组。注射后12 d,预处理hUMSC组大鼠创面组织中血管数量和Arg1阳性细胞数均明显多于常规hUMSC组和PBS组(P<0.05),常规hUMSC组大鼠创面组织中血管数量和Arg1阳性细胞数均明显多于PBS组(P<0.05);预处理hUMSC组大鼠创面组织中iNOS阳性细胞数明显少于常规hUMSC组和PBS组(P值均<0.05),常规hUMSC组大鼠创面组织中iNOS阳性细胞数明显少于PBS组(P<0.05)。结论TNF-α和IL-1β预处理可增强hUMSC的迁移能力、免疫调节能力和促血管生成能力,从而促进大鼠缺血创面愈合。