关键词:
X染色体骨髓酪氨酸激酶
巨噬细胞
非受体酪氨酸激酶
c-Jun氨基端激酶
信号通路
肿瘤坏死因子-α
摘要:
目的:探讨非受体酪氨酸激酶——X染色体骨髓酪氨酸激酶(BMX)对脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞分泌促炎性细胞因子——肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和脂多糖刺激巨噬细胞对大肠埃希菌吞噬功能的影响。方法:以巨噬细胞系RAW264.7细胞为实验对象,进行以下实验。①BMX对巨噬细胞分泌TNF-α的影响及其信号通路:实验分空白对照组、LPS组、25μmol/L BMX-IN-1+LPS组、75μmol/L BMX-IN-1+LPS组。LPS组用10 ng/mL LPS刺激1 h。25μmol/L BMXIN-1+LPS组和75μmol/L BMX-IN-1+LPS组预先用相应浓度的BMX抑制剂BMX-IN-1处理12 h,再用10 ng/mL LPS刺激1 h,流式细胞术检测巨噬细胞的TNF-α分泌量,蛋白质印迹法检测BMX、磷酸化c-Jun氨基端激酶(p-JNK)蛋白的表达。②BMX在炎症环境下对巨噬细胞吞噬能力的影响:带绿色荧光的大肠埃希菌(***)摇菌过夜,分光光度计测吸光度值。实验分空白对照组、LPS组、BMX-IN-1+LPS组。BMX-IN-1+LPS组预先用75μmol/L BMX-IN-1处理12 h,LPS组和BMX-IN-1+LPS组用10 ng/mL LPS刺激,同时,3组按照RAW264.7细胞∶***=1∶50的比例加入等量的大肠埃希菌。作用2 h后,流式细胞术检测巨噬细胞吞噬率。结果:①空白对照组、LPS组和不同浓度BMX-IN-1+LPS组TNF-α分泌量的差异有统计学意义(F=151.1,P<0.05),其中以LPS组的TNF-α分泌量[(78.68±3.67)%]最高,BMX-IN-1干预后TNF-α分泌量下降,以75μmol/L BMX-IN-1+LPS组下降最明显(P<0.05)。②蛋白质印迹法测定结果显示,LPS刺激后,细胞内BMX和p-JNK表达明显增强,预先加入BMX-IN-1可以抑制这种表达的升高,各组间BMX和p-JNK表达比较,差异有统计学意义(BMX:F=319.2,P<0.05;p-JNK:F=1897.0,P<0.05)。③流式细胞术检测巨噬细胞对大肠埃希菌吞噬率的结果显示:PBS组、LPS组和BMX-IN-1+LPS组比较,差异无统计学意义(F=0.46,P>0.05)。结论:非受体酪氨酸激酶BMX通过c-Jun氨基端激酶途径促进LPS刺激巨噬细胞分泌TNF-α,但BMX对LPS刺激巨噬细胞的吞噬功能没有影响。