关键词:
缺氧诱导因子-1α/血管内皮生长因子A信号通路
肿瘤藤
肝癌
人肝癌细胞
Balb/c小鼠
摘要:
目的观察肿瘤藤对人肝癌细胞(human hepatocellular carcinoma cells,HepG2)移植瘤小鼠的治疗作用,探索肿瘤藤抗肿瘤的作用机制。方法HepG2细胞于Balb/c小鼠左侧肩背部皮下接种建立HepG2移植瘤小鼠模型。将36只小鼠随机分为模型组、阴性对照组、阳性对照组和肿瘤藤低、中、高剂量组,每组6只。阴性对照组予以等剂量生理盐水灌胃,阳性对照组予以0.03 g/kg索拉非尼灌胃,肿瘤藤低、中、高剂量组分别予以肿瘤藤3.4 g/kg、6.8 g/kg、13.6 g/kg灌胃,每天2次,持续21天。苏木精—伊红染色法观察HepG2移植瘤组织病理结构,TUNEL法观察细胞凋亡,免疫组化法观察HepG2移植瘤组织CASP9、CD31、Ki67、MCM蛋白表达,免疫荧光法观察血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)荧光表达,实时荧光PCR及免疫印迹法观察HepG2移植瘤组织缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、VEGFA、CD31的mRNA及蛋白表达。结果苏木精—伊红染色结果显示,模型组、阴性对照组移植瘤组织细胞排列紧密,核形不规则,病理性核分裂增多。经治疗后,阳性对照组及肿瘤藤各剂量组移植瘤组织细胞排列变散乱、组织出现大面积凋亡、坏死。TUNEL结果显示,与模型组、阴性对照组比较,阳性对照组和肿瘤藤低、中、高剂量组凋亡细胞数量均明显增多(P<0.05)。免疫组化法结果显示,与模型组、阴性对照组比较,阳性对照组和肿瘤藤低、中、高剂量组均能上调CASP9蛋白表达(P<0.05),以肿瘤藤中剂量组效果最显著(P<0.05);阳性对照组和肿瘤藤低、中、高剂量组均能下调CD31、Ki67、MCM蛋白表达(P<0.05)。免疫荧光法结果显示,与模型组、阴性对照组比较,阳性对照组和肿瘤藤低、中、高剂量组均能减少VEGFA荧光强度(P<0.05)。实时荧光定量PCR与免疫印迹法结果显示,与模型组、阴性对照组比较,阳性对照组和肿瘤藤低、中、高剂量组均能下调HIF-1α、VEGFA、CD31的mRNA及蛋白表达(P<0.05),以肿瘤藤中剂量组效果最优(P<0.05)。结论肿瘤藤可能通过调控HIF-1α/VEGFA通路,抑制细胞增殖及血管生成进而促进肿瘤组织凋亡、坏死。