关键词:
复方蜥蜴散
胃癌
顺铂耐药
肿瘤细胞干性
IFN-γ/NF-κB/SNAIL轴
MKN45/DDP细胞
裸鼠
摘要:
目的基于干扰素γ(IFN-γ)/核因子κB(NF-κB)/SNAIL轴探讨复方蜥蜴散干预肿瘤细胞干性对胃癌顺铂耐药的增敏提效作用机制。方法(1)取对数生长期的MKN45细胞和MKN45/DDP耐药细胞,分别使用不同浓度(0、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2μg·mL^(-1))的顺铂(DDP)处理细胞48 h,采用CCK-8法测定细胞增殖能力及耐药指数。采用无血清悬浮成球实验验证MKN45细胞及MKN45/DDP耐药细胞的肿瘤干细胞特性。(2)将对数生长期MKN45/DDP细胞接种于BALB/c雄性裸鼠右前腋窝皮下,复制胃癌顺铂耐药裸鼠移植瘤模型。将模型复制成功的裸鼠随机分为模型组、顺铂组、复方蜥蜴散组及联合组,每组8只。模型组灌胃等体积生理盐水;顺铂组腹腔注射0.002 g·kg^(-1)顺铂,每周2次;复方蜥蜴散组灌胃2.8 g·kg^(-1)复方蜥蜴散水煎液,每天2次;联合组灌胃复方蜥蜴散水煎液(2.8 g·kg^(-1),每天2次)的同时腹腔注射顺铂(0.002 g·kg^(-1),每周2次);各组均连续干预4周。称量肿瘤质量并计算肿瘤体积;采用HE染色法观察肿瘤组织病理变化;TUNEL法测定肿瘤组织细胞凋亡情况;免疫组化法检测肿瘤组织Ki67、EpCAM、CD44蛋白表达情况;Western Blot法测定肿瘤组织多药耐药相关蛋白1(MRP1)、P-糖蛋白(P-gp)、EpCAM、CD44、IFN-γ、p65、p-p65、SNAIL蛋白表达水平。结果(1)与MKN45细胞比较,0.8、1.6、3.2μg·mL^(-1)顺铂组的MKN45/DDP耐药细胞存活率显著升高(P<0.05,P<0.01);MKN45细胞的IC50为0.96μg·mL^(-1),MKN45/DDP细胞的IC50为2.26μg·mL^(-1),MKN45/DDP细胞的耐药指数为2.36。与MKN45细胞比较,MKN45/DDP耐药细胞的成球能力显著升高(P<0.01)。(2)模型组裸鼠的肿瘤细胞形态不规则,排列较紧密,细胞核大,可见病理性核分裂象。与模型组比较,各给药组胃癌耐药MKN45/DDP细胞荷瘤裸鼠的肿瘤体积均显著缩小(P<0.01),肿瘤质量均显著降低(P<0.01);肿瘤细胞核分裂现象减少,细胞密度降低,排列较松散,可见细胞坏死象;肿瘤细胞凋亡率均显著升高(P<0.01);肿瘤组织中Ki67阳性表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01);肿瘤组织中的干性标志物EpCAM、CD44及耐药相关蛋白MRP1、P-gp的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05,P<0.01);肿瘤组织p-p65/p65、IFN-γ、SNAIL蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。与顺铂组比较,复方蜥蜴散组及联合组胃癌耐药MKN45/DDP细胞荷瘤裸鼠的肿瘤体积均显著缩小(P<0.01),肿瘤质量均显著降低(P<0.01);肿瘤细胞凋亡率均显著升高(P<0.01);肿瘤组织中Ki67阳性表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01),CD44、MRP1、P-gp、IFN-γ、SNAIL蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01);联合组裸鼠肿瘤组织中EpCAM、p-p65/p65蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论复方蜥蜴散能够有效抑制胃癌耐药MKN45/DDP细胞荷瘤裸鼠的肿瘤生长,抑制细肿瘤胞增殖,促进其凋亡,可能与通过调控IFN-γ/NF-κB/SNAIL轴抑制肿瘤细胞干性,从而降低对顺铂的耐药性有关。